Reagen Umum dalam Kultur Sel
Ketika sel atau jaringan hewan meninggalkan tubuh untuk dibiakkan di luar tubuh, mereka perlu menyediakan berbagai nutrisi yang dibutuhkan untuk pertumbuhan dan berbagai reagen yang diperlukan untuk pertumbuhan sel yang lebih baik secara in vitro. Pada edisi kali ini, saya akan memperkenalkan secara singkat beberapa komponen reagen yang digunakan dalam proses kultur sel dan fungsinya.
1. Komposisi media kultur sel
(1).Media kultur dasar
Media basal umum terutama meliputi MEM, DMEM, dan RPMI, yang terutama menyediakan sistem penyangga termasuk glukosa, asam amino, air, elemen jejak, dan natrium bikarbonat.
● Glutamin
Ini adalah asam amino esensial yang diperlukan untuk pertumbuhan sel dan berpartisipasi dalam sintesis protein dan metabolisme asam nukleat.
● Indikator fenol merah
Indikator asam-basa yang umum digunakan, berwarna kuning jika bersifat asam, merah jika netral, dan ungu jika bersifat basa. Fenol merah digunakan sebagai indikator nilai pH dalam medium.
● Sistem penyangga karbonat/PH
Sistem penyangga pH fisiologis. Karena produksi asam selama metabolisme sel, HCO3- dalam medium akan dikonsumsi secara bertahap, sehingga CO2 perlu diisi ulang pada waktunya untuk mempertahankan pH dalam kisaran tertentu.
(2).Serum hewan
Tambahkan 2%-20% serum ke media basal untuk membentuk media yang lengkap. Serum tidak hanya menyediakan sel dengan nutrisi dasar yang dibutuhkan untuk pertumbuhan, tetapi juga mengandung komponen penting yang terlibat dalam metabolisme sel seperti faktor pertumbuhan, hormon, elemen dan ion.
(3). Antibiotik
Untuk mencegah sel terkontaminasi selama proses kultur, campuran penisilin-streptomisin biasanya ditambahkan ke media lengkap, yaitu antibodi ganda. Penisilin terutama efektif melawan bakteri Gram-positif, dan streptomisin efektif melawan banyak bakteri Gram-negatif. .
2. Tripsin-EDTA
Tripsin dapat menghidrolisis protein antar sel dan kemudian memisahkan sel. EDTA adalah agen pengkelat kimia dengan toksisitas rendah dan memiliki efek diskrit pada sel yang melekat. Ketika keduanya digunakan dalam kombinasi, efisiensi sel pendispersi lebih tinggi. Langkah ini disebut sel pencernaan. Untuk sel yang berbeda, ada persyaratan yang berbeda untuk suhu, waktu, dan konsentrasi tripsin saat digunakan. Jika pencernaan tidak mencukupi, sel tidak dapat dicerna, dan pencernaan yang berlebihan akan menyebabkan kerusakan sel. Karena serum dalam medium dapat mengurangi aktivitas tripsin, medium lengkap biasanya digunakan untuk menghentikan pencernaan sel.
3. Penyangga PBS
PBS adalah larutan garam buffer fosfat dengan keseimbangan garam dan efek penyangga pH yang dapat disesuaikan. Biasanya digunakan untuk mencuci sel dan mempertahankan tekanan osmotik sel.
4. Dimetil sulfoksida (DMSO)
Pelindung sel penetrasi yang penting, dan komponen penting dalam cairan kriopreservasi sel. Selama proses kriopreservasi sel, DMSO dapat dengan cepat menembus membran sel dan masuk ke dalam sel, menurunkan titik beku, menunda proses pembekuan, meningkatkan konsentrasi ion dalam sel, mengurangi pembentukan kristal es dalam sel, dan mengurangi sel. kerusakan.
5. Penghambat mikoplasma
Kontaminasi Mycoplasma adalah sumber kontaminasi yang umum dalam proses kultur sel. Namun, penghambat mikoplasma dapat digunakan untuk menghilangkan mikoplasma dalam cairan sel pada tahap awal kontaminasi, sehingga percobaan dapat dilanjutkan.
6. Pewarna biru tripan
Reagen pewarnaan biologis yang biasa digunakan untuk mendeteksi integritas membran sel. Karena hilangnya integritas membran sel dan peningkatan permeabilitas, sel mati dapat diwarnai biru oleh trypan blue, sedangkan sel hidup tidak akan terwarnai karena memiliki membran sel utuh yang dapat mencegah trypan blue memasuki sel. Sel hidup dan mati dapat dibedakan dengan warna sel di bawah mikroskop, yang memudahkan penghitungan sel hidup.