1. Fluks deteksi instrumen
Hal pertama yang harus diperhatikan adalah seberapa sering laboratorium perlu menggunakan instrumen PCR kuantitatif. David Ginzinger, kepala peralatan analisis genom di Pusat Kanker Universitas California, San Francisco, telah menguji sebagian besar mesin PCR kuantitatif di pasaran. Dia mengatakan jika tidak digunakan dalam skala besar, misalnya, terutama digunakan untuk menguji gen yang diketahui, maka tidak perlu produk mahal yang mahal. Tetapi bagi laboratorium yang perlu menemukan target obat dan penanda penyakit baru, mereka membutuhkan instrumen yang dapat menampung pelat 384 sumur dan bekerja lebih cepat. Namun, hanya instrumen throughput tinggi seperti itu yang tidak cukup cepat, dan Anda akan menemukan bahwa preparasi sampel menjadi hambatan untuk pembatasan laju. Oleh karena itu, laboratorium dengan throughput tinggi sering kali memerlukan instrumen otomatis lebih lanjut. Selama tombol ditekan, instrumen akan secara otomatis memproses sampel, memurnikan asam nukleat, dan menyiapkan template PCR.
2. Kemampuan beberapa amplifikasi
Beberapa amplifikasi semakin panas. Peralatan PCR kuantitatif real-time tidak kebal. Instrumen PCR kuantitatif kelas atas memiliki beberapa saluran deteksi, sehingga instrumen dapat mendeteksi proses amplifikasi beberapa templat dalam tangki sampel yang sama. LightCycler2.0 baru memiliki 6 saluran deteksi, 3 lebih banyak dari aslinya. SmartCyclerⅡ memiliki 4 saluran deteksi. Stratagene, yang terkenal dengan produk perpustakaannya, juga memiliki instrumen PCR kuantitatif Mx3000P dengan harga kurang dari setengah harga Roche dan reputasi yang baik, yaitu, 4 saluran deteksi. Namun, beberapa amplifikasi tidak cocok untuk semua orang karena mempersulit percobaan.
3. Perangkat Lunak
Ketika Anda siap untuk memilih instrumen PCR kuantitatif, Anda harus memeriksa perangkat lunak terlampir. Apakah nyaman digunakan, dapatkah Anda melakukan analisis yang Anda butuhkan, ada beberapa format output. Namun perlu diperhatikan apakah software yang terlalu mudah digunakan ini relatif sederhana fungsinya dan tidak dapat melakukan perhitungan yang rumit. Perangkat lunak sebelumnya mengharuskan Anda untuk melakukan analisis lebih lanjut. Perangkat lunak baru sudah dapat menangani semuanya. Selain fungsi dasar, beberapa perangkat lunak juga dapat memiliki lebih banyak fungsi, seperti desain primer dan probe, desain analisis ganda, koreksi latar belakang, normalisasi data, dan sebagainya. Willian Demyan, kepala departemen aplikasi dan layanan teknis Departemen Sains Terapan Roche, menekankan bahwa PCR kuantitatif adalah proses amplifikasi geometris. Pada awalnya, ada perbedaan salinan, dan hasilnya bervariasi menurut urutan geometris.
4. Fleksibilitas
Peralatan laboratorium sibuk skala besar tentu patut ditiru, dan laboratorium konvensional juga dapat memiliki pilihan yang bagus. Pemasok saat ini memiliki banyak pakar teknis, tidak hanya untuk memahami kebutuhan Anda saat ini, tetapi juga sangat bijaksana bagi Anda untuk mempertimbangkan kemungkinan perubahan permintaan di masa mendatang, seperti menyediakan berbagai aksesori dan modul yang dapat diupgrade. MyCycler BioRad dapat memilih modul dan meningkatkan ke kuantifikasi waktu nyata. Instrumen PCR kuantitatif ABI memiliki berbagai tangki sampel yang berbeda, yang dapat mengubah tangki 96 sumur menjadi tangki ganda 384 sumur untuk memenuhi beberapa persyaratan throughput tinggi. Untuk laboratorium yang baru mulai melakukan qPCR dalam jumlah kecil, instrumen PCR kuantitatif SmartCycler II adalah pilihan yang baik. Modul dasar memiliki 16 tangki sampel kontrol suhu independen, dan 16 eksperimen berbeda yang sepenuhnya independen dapat dilakukan pada waktu yang sama atau sebelum dan sesudah. "Mengakses"; ketika laboratorium membutuhkan percobaan yang lebih besar, dapat ditingkatkan dengan sangat ekonomis, dari 1 menjadi 6 modul dasar, yaitu 96 sumur sampel. Meskipun pelat 96-sumur tidak dapat digunakan, ketika seorang siswa memulai sejumlah kecil eksperimen, yang lain juga dapat memasangnya kapan saja untuk memulai eksperimen independen mereka sendiri, dan mereka tidak saling mengganggu, yang meningkatkan fleksibilitas. Ini adalah pilihan yang sangat fleksibel untuk laboratorium yang hanya memiliki sedikit eksperimen dan memiliki anggaran yang ketat di awal.
5. Ketidakpastian
Meskipun perangkat lunak dapat dikoreksi sebagian, lebih baik membeli instrumen dengan kesalahan sistematis yang lebih sedikit tanpa memerlukan banyak koreksi perhitungan daripada dengan perhitungan. Cinzinger percaya bahwa perhatian khusus harus diberikan pada perbedaan antara sumur sampel instrumen. Selain perbedaan suhu yang terkenal antara lubang sampel, ada juga perbedaan kecil dalam jarak jalur optik antara lubang sampel dan probe deteksi, sedikit perbedaan panjang serat yang bertanggung jawab untuk mengirim dan menerima dan mentransmisikan sinyal. , perbedaan kecil dalam jarak dan sudut antara lensa dan lubang sampel, dan bahkan Efek sel sampel pada transmisi sinyal. Cinzinger telah melakukan tes yang sama pada sebagian besar instrumen PCR kuantitatif yang tersedia secara komersial. ia menguatkan sampel dan reagen yang sama secara real time di setiap sumur instrumen. Sayangnya, berkali-kali, akan ada hasil yang berbeda antara sumur sampel yang berbeda.
6. Pemilihan kit
Meskipun staf penjualan akan membanggakan kit kontrol kualitas yang sangat baik dan solusi akan mendapatkan hasil satu-satu, tetapi pembelian kit yang siap pakai bukanlah solusi untuk perbedaan tersebut. Eksperimen evaluasi yang serius dan eksperimen analitis adalah solusinya.