I. Pengoperasian: Menciptakan Lingkungan Anaerobik
1. Mengatur tekanan keluaran tabung nitrogen campuran dan tabung gas gabungan: Atur katup pengurang tekanan hingga sekitar 0,1 MPa.
2. Hidupkan sakelar daya dan pengontrol suhu, atur suhu yang diinginkan. Suhu di dalam inkubator di ruang operasi dapat dipilih dan dikontrol secara bebas.
3. Tempatkan aksesori dan peralatan yang diperlukan sesuai dengan kebutuhan penggunaan, dan masukkan dua kantong plastik tidak beracun ke dalam ruang operasi.
4. Masukkan 1000 g butiran paladium kering (tertutup rapat) dan 500 g desikan, bersama dengan indikator anaerobik (tertutup rapat), ke dalam ruang operasi.
5. Tutup rapat pintu dalam dan luar ruang pengambilan sampel dan lakukan pengecekan vakum.
6. Penggantian Nitrogen Sekunder di Ruang Operasi:
(1) Masukkan selang karet ke dalam lubang masuk udara ruang operasi, dan masukkan ujung lainnya ke dalam kantong plastik.
(2) Hubungkan lubang masuk nitrogen, buka katup kontrol nitrogen, isi kedua kantong plastik dengan nitrogen, lalu ikat rapat lubang kantong.
(3) Pasang sarung tangan lateks pada cincin flensa panel pengamatan dan ikat rapat.
(4) Secara bertahap lepaskan nitrogen dari kantong plastik ke dalam ruang operasi hingga semua nitrogen dilepaskan.
7. Penggantian Nitrogen Sekunder di Ruang Operasi: Ulangi proses pengisian nitrogen, dan perhatikan untuk membuka dan menutup katup pembuangan setiap saat.
8. Penggantian Gas Campuran Tersier di Ruang Operasi:
(Rasio gas campuran: N2 90%; H2 5%; CO2 5%).
(1) Ubah jalur gas, buka katup masuk gas campuran, dan buka dan tutup katup buang kapan saja selama pengisian.
(2) Setelah gas campuran mengisi kantong plastik, tutup katup langsung gas campuran (katup tiga arah).
(3) Secara bertahap lepaskan gas campuran dari kantong plastik ke ruang operasi.
(4) Setelah tiga kali pertukaran udara, kandungan oksigen di ruang operasi berkurang hingga jumlah yang sangat sedikit.
9. Nyalakan penangkap oksigen butiran paladium di ruang operasi dan hubungkan catu daya ke perangkat deoksigenasi katalitik oksigen. Setelah satu jam, amati perubahan warna strip indikator anaerobik. Perubahan warna menunjukkan bahwa ruang operasi telah mencapai lingkungan anaerobik.
10. Nyalakan lampu sterilisasi ultraviolet untuk mensterilkan ruang. Waktu sterilisasi ditentukan oleh pengguna.
II. Penempatan dan Kultur Strain Bakteri
1. Periksa dan tutup pintu ruang pengambilan sampel.
2. Buka pintu luar ruang pengambilan sampel, tempatkan strain bakteri ke dalam ruang pengambilan sampel, lalu tutup pintu luar.
3. Lakukan tiga proses pembersihan dan penggantian nitrogen di ruang pengambilan sampel: pertama, lakukan evakuasi hingga tingkat vakum 500 mmHg (66 kPa) atau lebih tinggi, kemudian buka katup nitrogen secara manual agar jarum penunjuk kembali ke nol sebelum melanjutkan ke operasi berikutnya.
4. Jika tingkat vakum yang lebih rendah dipilih, jumlah siklus penggantian perlu ditingkatkan.
5. Setelah membuka dan menutup pintu ruang pengambilan sampel, vakum rendah 100 mmHg (13 kPa) harus diterapkan untuk inspeksi dan bantuan.
6. Kondisi untuk penggunaan inkubator anaerobik secara terus menerus dalam jangka panjang:
(1) Amati bilah indikator anaerobik di ruang operasi setiap hari. Jika normal, dapat terus digunakan. Jika tidak normal, udara harus diganti.
(2) Sejumlah kecil gas campuran harus terus dimasukkan untuk memastikan hidrogen yang ditambahkan bergabung dengan sejumlah kecil oksigen untuk penyerapan katalitik, menjaga keadaan anaerobik. Laju aliran gas campuran harus sekitar 10 ml per menit.
(3) Ganti desikan dan pengering setiap 3 hari inkubasi terus menerus.
7. Aplikasi sterilisasi batang inokulasi:
(1) Gunakan kawat pemanas nikel-kromium untuk membuat korsleting dan memanaskannya hingga merah menyala untuk sterilisasi (batang inokulasi).
(2) Lilin leleh dapat diletakkan langsung pada batang inokulasi, dan lubang lilin penyegel tabung reaksi dapat diputar untuk melelehkan lilin.