Gambar 1 Diagram skematik polipeptida fase padat
Pada tahun 1963, Merrifield mengusulkan metode sintesis peptida fase padat, yang membuka ruang yang luas untuk penelitian peptida dan sangat mendorong pengembangan biologi molekuler dan bidang lainnya. Untuk alasan ini, Merrifield dianugerahi Hadiah Nobel dalam bidang kimia pada tahun 1984.
Sejak tahun 1990-an, dengan pematangan bertahap teknologi sintesis polipeptida, semakin banyak polipeptida aktif telah dikembangkan dan diterapkan secara luas di bidang obat-obatan, makanan, kosmetik, pertanian, peternakan, dan sebagainya. Metode sintesis polipeptida fase padat juga telah banyak digunakan. Dalam makalah ini, sintesis fase padat dan pembelahan peptida diperkenalkan menurut Reaktor Sintesis Peptida Fase Padat.
Gambar 2 Aplikasi lapangan reaktor sintesis polipeptida fase padat lengkap
I. Retak resin
saya. Memberi makan
Menambahkan resin ke dalam sintesis fase padat, menambahkan DCM untuk pembengkakan, pengeringan, menambahkan DMF untuk mencuci, setelah mencuci, tiriskan untuk siaga.
ii. Kondensasi
Melarutkan asam amino dalam volume tertentu DMF, menambahkan agen kondensasi untuk aktivasi, memasukkan ke dalam synthesizer fase padat, menambahkan DMF ke konsentrasi reaksi, dan mengaduk untuk reaksi.
aku aku aku. Menghapus kelompok pelindungDerajat reaksi dideteksi dengan reagen Kaiser. Setelah reaksi selesai, pelarut dipompa keluar, diikuti dengan pencucian DMF. Larutan PIP/DMF ditambahkan untuk menghilangkan gugus pelindung. Derajat reaksi dideteksi dengan pereaksi Kaiser. Setelah reaksi selesai, pelarut dipompa keluar, dilanjutkan dengan pencucian DMF, yang selanjutnya ditambahkan asam amino.
iv.Siklus kondensasi
Menghubungkan asam amino secara berurutan sesuai dengan urutan resin, melakukan operasi siklus kondensasi sesuai dengan langkah-langkah “deprotection-washing-activating amino acids-feeding condensation-washing”, dan menyelesaikan kondensasi n asam amino yang tersisa sesuai dengan urutan asam amino .
saya. Pengosongan
Setelah sintesis, resin dicuci silang dengan IPA dan DCM untuk menyelesaikan kontraksi dan pelepasan resin ke baki stainless steel.
ii. Pengeringan resin
Pengeringan resin dalam oven pengering vakum pada suhu kamar, penimbangan setelah pengeringan, dan penghitungan rendemen.
aku aku aku. Pemulihan cairan limbah organik, pengolahan terpusat.
iv. Membersihkan
Operator harus membersihkan lokasi tepat waktu setelah operasi.
I. Retak resin
saya. Sediaan cair
Siapkan larutan lisis tersebut sesuai dengan proporsi komponen larutan lisis, dan tempatkan larutan lisis dalam freezer untuk penyimpanan dingin terlebih dahulu.
ii. Memberi makan
Menambahkan resin peptida ke dalam ketel reaksi, menambahkan cairan cracking yang telah didinginkan sebelumnya, dan mengaduk untuk reaksi.
aku aku aku. Pengosongan
Pembuangan larutan reaksi tersebut setelah cracking, penyaringan untuk menghilangkan resin, dan pencucian dengan TFA.
iv. Konsentrasi
Pindahkan cairan yang retak itu ke rotavapor untuk konsentrasi ke volume kecil pada suhu kamar.
v. Curah hujan
Larutan reaksi pekat dituangkan ke dalam metil tert-butil eter yang telah didinginkan sebelumnya (disingkat eter) dan diaduk untuk mengendapkan sejumlah besar padatan.
vi. Sentrifugasi
Cairan keruh disentrifugasi dan dicuci dengan eter yang telah didinginkan sebelumnya.
saya. Pengeringan peptida mentah
Peptida mentah yang dimurnikan dipindahkan ke oven pengering vakum untuk dikeringkan pada suhu kamar.
ii. Pemulihan cairan limbah organik, pengolahan terpusat.
aku aku aku. Membersihkan
Operator harus membersihkan lokasi tepat waktu setelah operasi.
Gambar 3 Set lengkap ketel pembelahan polipeptida fase padat
Dalam proses produksi yang sebenarnya, peptida mentah yang retak juga perlu mengalami proses seperti pemurnian, konsentrasi, filtrasi, dan pengeringan beku, yang tidak akan dijelaskan secara rinci dalam makalah ini.
Saat ini, proses sintesis rantai peptida yang lebih pendek relatif matang, sedangkan untuk zat protein dengan massa molekul lebih besar dan rantai peptida yang lebih panjang, teknologi sintesis fase padat memiliki keterbatasan tertentu, dan sementara itu, ada masalah seperti biaya tinggi dan disertai dengan reaksi samping. Oleh karena itu, berdasarkan sintesis peptida fase padat, cara baru masih perlu ditemukan.